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當前位置:首頁產品中心核酸合成與提取RNA提取AP01L203柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒

柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒

產品簡介

柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒創新性地采用過柱純化的方法,能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細胞,有效提取總蛋白,包括離心管柱和經過優化的細胞裂解液。與傳統的 RIPA 裂解液相比,本試劑盒可以提取出更多的蛋白,避免在細胞裂解過程中由于 DNA 沉淀和不溶性細胞碎片導致的部分蛋白丟失。

產品型號:AP01L203
更新時間:2025-07-02
廠商性質:生產廠家
訪問量:1361
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品牌Life-iLab/李記生物貨號AP01L204
規格100T供貨周期現貨
應用領域生物產業

柱式動物組織細胞總蛋白抽提試劑盒

產品描述

本試劑盒創新性地采用過柱純化的方法,能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細胞,有效提取總蛋白,包括離心管柱和經過優化的細胞裂解液。與傳統的RIPA裂解液相比,本試劑盒可以提取出更多的蛋白,避免在細胞裂解過程中由于DNA沉淀和不溶性細胞碎片導致的部分蛋白丟失。采用過柱純化技術,最小可處理20 μL樣本與裂解液混合物,最大可達500 μL。提供變性和非變性兩種細胞裂解液,用戶可根據后續的實驗需求選取不同的裂解液。

【注】:變性裂解液可用于SDS-PAGEWestern-blotting ELISA 分析;非變性裂解液可用于IPCo-IPenzyme assays 等分析。

訂購信息

產品名稱

貨號

規格

柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒

AP01L203

50T

柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒

AP01L204

100T

產品組分

組分

規格(50T

規格(100T

保存溫度

A.變性裂解液

30mL

60mL

4

B.非變性裂解液

30mL

60mL

4

C.蛋白提取離心管柱

50

100

RT

D.組織研磨棒

5

10

RT

運輸與保存

常溫運輸。組分AB4℃保存,組分CD常溫保存,有效期12個月。【注】:研磨棒可重復使用。低溫下變性裂解液會出現成分析出,緩至室溫或水浴鍋溫浴即可。

使用方法

細胞樣品

一、 樣品裂解

變性液提取

1.       去除細胞培養液,用預冷的PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】:裂解液過少會使細胞裂解不充分,影響蛋白提取的質量。

2.       用槍吹打數下,轉移裂解液至離心管柱中。【注】:少量沒有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質量。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min

4.       收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】:細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.       去除細胞培養液,用預冷的 PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】:裂解液過少會使細胞裂解不充分,影響蛋白提取的質量。

2.       用槍吹打數下,冰上放置10min后轉移裂解液至離心管柱中。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min

4.       收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】:細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

二、懸浮細胞

變性液提取

1.         收集細胞 0.5~2x107 1.5mL離心管中,1mL預冷的PBS洗滌兩次,1,000xg 離心3min,棄上清,重復三次。

2.         根據細胞沉淀體積加入同體積的預冷PBS重懸細胞后,根據細胞量加入對應量的變性裂解液。【注】:表中為推薦用量;PBS不可多加,只要能使細胞重懸即可。

細胞沉淀體積(uL

加入裂解液體積(uL

3

20

5

50

10

150

20

250

40

500

 

3.         劇烈震蕩15s后,轉移裂解液于離心管柱中。【注】:少量沒有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質量。                   

4.         14,000 rpm 室溫離心1min(如果裂解液過于粘稠可增加離心時間)。

5.         收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】:細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.         收集細胞 0.5~2x107 1.5mL離心管中,1mL 預冷的 PBS 洗滌兩次,1,000xg 離心 3min ,棄上清,重復三次。

2.         根據細胞量加入對應量的非變性裂解液。【注】:表中為推薦用量。

細胞沉淀體積(uL

加入裂解液體積(uL

3

20

5

50

10

150

20

250

30

500

40

500

 

3.         劇烈震蕩15s后,冰上孵育10min

4.         轉移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rpm 室溫離心1min

6.         收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液。【注】:細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

三、組織樣品

變性液提取

1.         把組織剪切成小碎片。

2.         加入適當裂解液,一般100mg 組織加入1mL 裂解液。【注】:如果裂解不充分可適當增加裂解液。

3.         用組織勻漿器或研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織,直至充分裂解。【注】:如果是心肌,皮膚等不易研磨的組織應使用勻漿器勻漿。

4.         轉移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min(如果裂解液過于粘稠可增加離心時間)。

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】:如果組織樣品非常小,可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。

非變性液提取

1.         組織剪切成小碎片。

2.         加入適當裂解液,一般100mg 組織加入1ml 裂解液。【注】:如果裂解不充分可適當增加裂解液。

3.         用組織勻漿器或研磨棒研磨組織,直至充分裂解。冰上放置10min。【注】:如果是心肌,皮膚等不易研磨的組織應使用勻漿器勻漿。

4.         轉移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】:如果組織樣品非常小,可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。

注意事項

1.    本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.    本產品不含蛋白酶抑制劑,使用中應加入蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號: AP02L084) 防止蛋白降解。

3.    本產品不兼容Bradford法測蛋白濃度,請使用 BCA蛋白定量試劑盒(貨號: AP12L025

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